以下是关于赛默飞HPLC和变色龙7软件操作方法的全新整理，希望能为需要的同学提供有价值的参考。
一、启动软件与连接仪器
双击“控制器”图标，点击“启动仪器控制”，待仪器状态显示为“运行空闲”后，双击“变色龙软件7”图标进入色谱工作站。确保工作站左上角的“模块状态”显示为“Connected”，表示已成功连接。
二、排气操作
打开输液泵的盖子，找到排气阀并逆时针拧松一圈半到两圈。设置A流动比例为100%，泵流速为3ml/min（可根据需要调整）。点击冲洗按钮，在排气阀打开的情况下忽略警告执行。重复此操作，分别进行b、c、d流路的排气，每次排气约60秒。期间注意观察各流路软管内是否有气泡，确保气泡完全排出。排气结束后，再次点击冲洗按钮停止排气，并在降低流速后拧紧排气阀（注意：在拧紧排气阀前，确保流速已降低至正常范围，压力小于150bar）。
三、自动进样器设置
在加样前，选择自动进样器选项，并按顺序进行灌注注射器、清洗缓冲环和外部清洗针的操作。
四、创建仪器方法
点击“创建”按钮，选择“仪器方法”。设定运行时间，并取消选择所有通道。点击“下一步”，编写各瓶溶剂名称，并继续点击“下一步”。删除平衡阶段后，编写仪器方法（注意：每个时间点仅代表该时刻的流速和各相比例）。接下来，采用默认的进样针参数和进样模式。进行温度控制设置（具体温度可根据实验条件调整，本例中设为30℃）。设置波长信号后，继续完成剩余步骤，并在方法界面左上角保存该仪器方法。
五、平衡基线
设置流速为1ml/min，并根据需要调整有机相与流动相的比例。点击马达启动输液泵，并设置UV选项的波长。点击紫外灯，当打钩表示点灯成功后进行基线平衡操作。通过不断调整有机相与流动相的比例，直至达到进样所需的条件（本例中从100%有机相逐渐调整至20%有机相）。
六、创建处理方法
在创建菜单下选择“处理方法”，并选择“基本定量”。点击“下一步”，命名并保存处理方法。打开已保存的处理方法，采用仪器的默认数据处理方式。
七、样品检测与序列创建
通过创建菜单进入“序列”选项，编写相关信息后点击“下一步”。浏览并选择已建好的仪器方法和处理方法，继续完成剩余步骤并命名序列。待基线平衡后，在数据界面点击“开始运行”以启动样品检测。在仪器操作界面可实时查看当前情况（请注意检查队列中前面的队列是否已完成）。
八、柱子清洗（先水洗后醇洗，分为快洗和慢洗）
快洗方法：先将比例调至100%醇:0%水，再调至0%醇:100%水，最后回到100%醇:0%水进行柱子保存。注意在清洗过程中需时刻关注压力值的变化。
慢洗方法：创建仪器方法的步骤与上述相同，但运行时间应尽量设置得较长。在编写仪器方法时，可尝试如下设置（以0min时各相比例与HPLC工作时相同为例，确保各相试剂充足，并根据A:B=1：1时的柱压调整具体流速）。
九、注意事项
每日需更换HPLC流动相，并通过过滤膜进行过滤。若同学们有任何交流需求，请随时私信联系。
通过以上步骤，您应该能够更好地掌握赛默飞HPLC和变色龙7软件的操作方法。希望这些信息能对您有所帮助！
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