超详细Nanodrop结果判读！（下）——A260/A280与A260/A230比值偏高怎么办？

在之前的《超详细Nanodrop结果判读！（上）》中，我们探讨了A260/A280与A260/A230比值的正常区间，该区间内的比值通常被视作纯核酸的标志。

随后的《超详细Nanodrop结果判读！（中）》一文，则详细剖析了DNA/RNA提取纯化过程中常见的污染物，如蛋白质、胍盐、苯酚等，以及这些污染物如何影响A260/A280与A260/A230的比值。

这些污染物在特定波长（如280nm或230nm）处的吸光性，会导致比值降低。然而，实验过程中有时会遇到比值偏高的情况，这是何故呢？接下来，让我们继续深入探究。

1. DNA中的RNA残留

在提取基因组DNA（例如从细菌中提取）时，通常会加入RNase并在37℃下孵育10分钟来去除RNA。但由于细胞特性的差异，RNA可能仍会有残留。

为了探究RNA对DNA浓度及两个比值的影响，Giron Koetsier等进行了实验研究，他们在100ng/μl的DNA中混入了不同比例的RNA，并对Nanodrop的检测结果进行了分析。

研究结果显示：

a. RNA的残留会导致DNA浓度检测值偏高；

b. 随着RNA比例的增加，A260/A280的比值也会上升。当RNA占比超过20%时，A260/A280的比值会超过1.9。但值得注意的是，即使RNA残留比例高达50%，A260/A280的比值也仅为1.99，仍处于可接受范围内。因此，单纯依靠A260/A280的比值来判断RNA残留并不十分准确。

若检测到RNA残留，可通过延长RNase在37℃下的孵育时间，并再次进行纯化后测定来解决。

此外，还有RNA降解、EDTA影响以及Nanodrop的blank操作等因素也可能导致A260/A280与A260/A230比值偏高，实验人员需仔细分析、逐一排查。

综上所述，A260/A280与A260/A230的比值确实是评估核酸质量的重要指标。当遇到比值异常时，可依据本文所探讨的原因进行问题定位与改进。愿各位的实验都能顺利进行！